1、植物组织培养的概念(Plant tissue culture)
指在无菌和人工控制的环境条件下,利用人工培养基(medium),对植物的胚胎、器官、组织、细胞及原生质体进行培养,使其再生完整植株的技术。
2、培养过程的类型:初代培养和继代培养。
3、物理状态的类型:液体培养和固体培养。
4、实验室布局:准备室、无菌室(接种室)、培养室、驯化室(温室)
5、洗涤方法:重铬酸钾洗液/无磷中性洗涤剂洗净法,超声波洗净法
6、器具灭菌法:干热灭菌法,高压蒸汽灭菌法
7、培养基灭菌法:高压灭菌法,过滤除菌法,部分除菌法
8、培养基的成分
水分、无机盐、有机营养成分、植物生长调节物质、琼脂、pH值、抗褐变物质等
9、有机营养成分:碳源及能源,维生素类,氨基酸及有机添加物
10、植物生长调节剂:生长素类、细胞分裂素类、赤霉素(GA3)、脱落酸(ABA)、其他类(多胺、多效唑)
11、生长素类中使用最广泛、可以高温灭菌的是:萘乙酸
12、生长素类中能够强烈诱导脱分化愈伤组织的是:2,4-D
13、生长素类中生根效果最好的是:吲哚丁酸IBA
14、培养基pH通常调至:5.7-5.8
15、有时为了减少外植体的褐变,需要向培养基中加入一些防止褐化的物质,如活性炭、维生素C等
16、硝酸盐含量较高的培养基:B5和N6
17、MS主要特点是无机盐浓度高,特别是硝酸盐、钾离子和铵离子含量均较高。是目前使用最广泛的培养基。
18、B5培养基是为大豆组织培养设计的,铵的含量比较低、硝酸钾含量较高。
19、N6是为水稻、小麦以及其他植物的花粉与花药培养中被广泛使用(朱至清等,1974),特点是硝酸钾、硫酸铵含量较高且不含钼。
20、White培养基(低无机盐类培养基)
一种无机盐类浓度较低的培养基,用途广泛,非常适合生根培养和幼胚的培养。
21、WPM培养基(木本植物培养基)
氮的含量比较低,无机盐含量也低,有利于木本植物组织的生长与分化
22、全能性的表现方法:离体和培养
23、植物细胞全能性的实现途径:器官发生途径和胚状体发生途径
24、组织分化和器官分化的基础是细胞分化。
25、植物组织培养中形态发生分为:器官发生,体细胞胚胎发生。
26、一个已分化的植物细胞若要表现它的全能性,形成完整植株,则分化组织需要依次经过“脱分化”和“再分化”两个过程。
27、器官分化可以分为两种情况:器官型和器官发生型。
28、愈伤组织形成有三个阶段:诱导期(启动期)、分裂期、分化期。
29、间接胚胎发生需要经历五个阶段,分别是胚性愈伤组织的诱导、体细胞胚胎诱导、体细胞胚胎早期分化发育、体细胞胚胎成熟、体细胞胚胎萌发和成苗。
30、双子叶植物体细胞胚胎发育阶段:原胚、球形胚、心形胚、鱼雷形胚、子叶形胚
31、植物器官和组织培养的基本程序为:获得无菌外植体、形态发生、诱导生根与再生植株的移栽。
32、外植体灭菌常用的灭菌剂:次氯酸钠、氯化汞、酒精等。
33、诱导生根的方法:培养基诱导生根、浸泡法生根。
34、在茎段培养中,促进腋芽增殖用6-BA 是最为有效的
35、在生根培养时最好在培养基中加0.3%活性炭,以促进生根
36、组织培养中用得最多的一个取材部位是茎尖。
37、茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为微茎尖培养和普通茎尖培养。
38、茎尖培养生长太快的可能原因:一是生长素浓度过高,引起细胞疯狂分裂而导致愈伤组织的形成;二是光照太弱或温度太高。
39、植物种子培养:指受精后发育不全的未成熟种子(胚拯救)与发育完全的成熟种子(获得无菌苗)进行离体培养的技术。
40、花药属于:器官培养;花粉属于:细胞培养;花粉花药培养主要是体细胞胚胎途径(胚状体发生途径)。
41、雄核的不对称发育途径是在花粉内形成一个较大的营养核和一个较小的生殖核,分为A-V途径、A-G途径、A-VG途径。
42、花粉发育阶段:大多采用单核期的花粉培养。
43、花粉前处理:低温、高温、饥饿或交叉处理。
44、花粉分离纯化方法:自然散落法、挤压法、机械游离法
45、花粉培养方式有:平板培养、液体培养、看护培养、微室培养、条件培养基培养
46、花粉和花药植株的倍性的鉴定:染色体直接计数、间接鉴定(流式细胞仪,细胞形态,植物形态,高/低温胁迫法,杂交鉴定法,分子标记等)
47、染色体加倍方法:茎段培养和化学试剂诱变。
48、用于染色体加倍诱变的化学试剂有:秋水仙素诱导和除草剂处理。
49、离体胚培养可分为幼胚培养和成熟胚培养。
50、幼胚迅速萌发为幼苗,不能维持胚性生长,称为“早熟萌发”
51、碳水化合物在胚培养中的作用:调节渗透压、作为碳源和能源、防止幼胚早熟萌发。
52、幼胚培养加入的天然有机物有:椰子汁,胚乳提取液等
53、离体授粉的三种方式:柱头授粉、子房授粉、胚珠授粉。
54、原生质体分离的方法:机械法和酶解法。
55、原生质体活力测定方法:FDA法、台盼蓝染色法、形态观察法
56、原生质体培养方法:平板培养法(琼脂糖包埋)、液体浅层培养法、固-液结合培养法
57、调节渗透压常用的有:甘露醇、山梨醇、蔗糖和葡萄糖等
58、原生质体融合类型:对称融合和不对称融合。
59、体细胞杂种细胞的筛选方法:互补筛选法、机械筛选法
60、植物病毒的传播分为介体传播和非介体传播。介体传播:昆虫传播、螨类传播、土壤中的介体;非介体传播:机械传播、无性繁殖材料和嫁接传播、种子和花粉传播
61、植物病毒具有系统侵染的特点。
62、病毒的运输:通过胞间连丝、韧皮部等植物本身的运输系统扩散病毒。
63、植物脱毒的物理方法:热处理、冷冻疗法。生物方法:茎尖脱毒法;愈伤组织脱毒法;微体嫁接离体营养脱毒法;珠心组织脱毒法。
64、植物脱毒的热处理方法:热水浸泡、高温空气处理
65、脱病毒植株的检测方法:直接观察法、指示植物法、血清检测法、核酸检测法、电子显微镜鉴定法
66、植物快繁器官的形成方式:短枝发生型、丛生芽发生型、不定芽发生型、胚状体发生型、原球茎发生型
67、单细胞分离来源:植物器官或愈伤组织
68、单细胞培养方法:平板培养法、看护培养法、微室培养法、条件培养基培养。
69、无性系变异包括表型变异、染色体变异、DNA结构变异
70、限制生长的离体保存方法:有低温、高渗透压、生长延缓剂、低氧分压等方法。
71、保存原理:既没有溶液效应对细胞的伤害,也没有因冰晶形成对细胞造成机械伤害。
72、转基因的受体材料:新鲜的块茎、茎段、叶片(子叶)、叶柄、原生质体、愈伤组织、胚性愈伤组织和胚性悬浮细胞等。
73、转化方法:农杆菌载体介导转化法、载体直接或无载体基因导入法、活体转化法